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HPLC 柱前衍生法分析黄曲霉毒素 B1

浏览次数:70 日期:2017-12-05

HPLC 柱前衍生法分析黄曲霉毒素 B1

   黄曲霉毒素(AFT)对有机体具有致突、致癌、致畸性,被列为可能的人体致癌物质。 黄曲霉毒素在多种人类食物中被发现,如玉米、坚果、花生等等,以 B1、B2、G1、G2 的形式存在。AFTB1 在动物体内可转变成两 种主要代谢产物- AFTM1 和 AFTQ ,前者的毒 性和致癌性与AFTB1相近,主要存在于动物 的尿和乳汁中。

黄曲霉毒素可使用正相和反相液相色谱法分离,反相色谱法操作较容易、流动相毒性也较低,被广泛采用。使用反相液相色谱检测时,可通过柱前衍生法或柱后衍生法,提高AFTB1 、AFTG1的检 测灵敏度 ,使之与 AFTB2、AFTG2 在相近水平下检测。柱前衍生法无需专用柱后衍生反应系统,方法简单。本方法通过三氟乙酸(TFA)柱前衍生,HPLC 检测黄曲霉毒素 B1。该方法可用于 4 种黄曲 霉毒素 B1、B2、G1、G2  同时检测,也可用于 AFTM1 检测。

 

    样品前处理

取 50μL 黄 曲霉毒素 B1 标样溶 液 (10ng/mL,溶剂苯-乙腈溶液(98:2 v/v)),用氮气吹干,加入200μL正己烷和100μL三氟乙酸, 混匀1min,室温下放置10min,氮气吹干,用乙腈水溶液(乙腈/水 85:15 v/v) 50μL重新溶 解,混匀30s,经0.45μm滤膜过滤,供液相色谱仪检测用。

■  LC 分析条件

仪器:Shimadzu   LC-20A   液相色谱系统(含 LC-20AT 二元泵、CTO-20A 柱温箱,RF-10AXL荧光检测器,LCsolution 色谱工作站)

色谱分析条件

流动相:甲醇:乙腈:水=1:3:6

流速  :1.0mL/min

色谱柱:Shim-pack GVP-ODS (4.6mm*10mm);

Shim-pack VP-ODS (4.6mm*150mm,5μm) 激发波长 365nm 

 发射波长 425nm 柱温:40℃ 进样量:10μL

■  分析结果

黄曲霉毒素 B1(AFTB1)标样色谱图及分析结果

 

 

 

  表 1    黄曲霉毒素 B1 分析结果 

 

 

化合物

 

标样浓度

(ng/mL)

保留时间

(min)

 

峰面积

 

峰高

AFTB1

衍生

10

3.368

329246

37098

AFTB1

未衍生

10

6.721

12685

1024

  ■  结论

  三氟乙酸柱前衍生法可用于 AFTB1 检测,增强其荧光强度,提高检测灵敏度。通过以上实验检测 AFTB1 标样(10ng/mL),未经衍生标液的信噪比为 42,衍生后信噪比提高至S/N=1434

所属类别: 解决方案